Das NEFA Assay Kit ist ein Werkzeug zur Quantifizierung von NEFA

NEFA-Assay-Kit ist ein Tool zur Quantifizierung von NEFA (Stickoxid). Es dient zur Bestimmung der NEFA-Konzentration in Blut- oder Gewebeproben. NEFA ist ein lebenswichtiger Nährstoff, der für die Regulierung des Energiestoffwechsels, der Erregbarkeit des Herzens, der neuromuskulären Erregungsleitung, des Blutdrucks und der Blutgerinnung verantwortlich ist. Es kommt hauptsächlich in Knochen, Muskeln, Weichteilen und roten Blutkörperchen vor.

Vorbereitung

NEFA ist ein kleines Protein mit 50,2 kDa, das die Fähigkeit besitzt, an DNA zu binden. Es handelt sich um einen zytosolischen Fettsäuresynthase-Komplex (FAS) vom Typ I, der nicht veresterte Palmitinsäure produziert. In Gegenwart von Acyl-CoA-Oxidase (ACS) oxidiert der FAS-Komplex 3-Methyl-N-ethyl-N-(b-hydroxyethyl)-anilin zu 4-Aminoantipyrin, dem molekularen Vorläufer für Acetyl-CoA. Dieser Prozess ist ein entscheidender enzymatischer Prozess für alle eukaryotischen Organismen.

Obwohl NEFA möglicherweise nicht die große Masse eines Fetts hat, ist es eine wichtige Energiequelle für periphere Gewebe. Es wird von der Leber metabolisiert und im Komplex mit Albumin in periphere Gewebe transportiert. NEFA wird auch von einer Thioesterase (TE)-Domäne des FAS-Komplexes freigesetzt.

Pipettieren

ELISA-Kits werden zum Nachweis kleiner chemischer Verbindungen, Proteine ​​und Peptide verwendet. Diese Kits basieren auf rekombinanten Proteinen, die in E. coli exprimiert werden. Die Kits enthalten kein Azid, Thimerosal und andere natürliche Ressourcen.

Im Kit sind Reagenzien wie BSA, pyrogenfreier Verdünnungspuffer und Waschlösung enthalten. Die Waschlösung ist bei 2–8 °C zwei Wochen lang stabil. Der Verdünnungspuffer enthält 0,9 % physiologische Kochsalzlösung.

Das Kit verfügt über einen internen NEFA-Standard. Dieses wird mit NEFA in einer Konzentration versetzt, die der erwarteten Konzentration in der Probe entspricht. Zur Berechnung der NEFA-Konzentration in der Probe wird die Absorption des blau-violetten Pigments bei 546 nm gemessen.

Kolorimetrisch

Die Verwendung des WAKO NEFA-Kits hat zu einer Vielzahl von Ergebnissen geführt, darunter auch einige, die unsinnig sind. Dennoch ist das NEFA-Kit ein würdiger Kandidat, wenn es um die Bestimmung des relativen Fettsäuregehalts tierischer Gewebeproben geht. Daher ist das NEFA-Kit einer der beliebtesten Labortests. Das Kit enthält Anweisungen zum Testen verschiedener Arten von Proben, darunter Blut, Serum, Speichel und verschiedene Lipide.

Das Spannendste an dem Kit ist, dass es zur Messung einer Vielzahl von Fettsäuren verwendet werden kann, einschließlich derjenigen, die häufig in Lipiden vorkommen. Das Kit enthält eine Reihe von Enzymen zum Nachweis einer Vielzahl von Fettsäuren, einschließlich der bei Menschen und Tieren vorkommenden C-8- und C-16-Fettsäuren. Dennoch wird das Kit nicht für den Einsatz in hochpräzisen FFA-Konzentrationen über einen weiten Bereich empfohlen.

Elektrochemisch

NEFAs sind wichtige Fettsäuren für die menschliche Gesundheit, werden jedoch selten untersucht. Zudem ist ihre Erkennung sehr aufwendig. Daher kann die Überwachung von Konzentrationsänderungen zu einer genaueren Krankheitsprävention und -behandlung beitragen. In dieser Studie wurde ein elektrochemisches Assay-Kit für NEFA entwickelt, das PDA-MWCNT als Sensoroberfläche verwendet. Diese Elektrode zeigte eine gute elektrokatalytische Aktivität für NEFA-Oxidationsschritte und konnte in realen Anwendungen eingesetzt werden.

Die Enzymelektrode bestand aus einem mehrschichtigen Verbundfilm aus PDA-MWCNT und ACOD, ACS und Polymer. Die Reihenfolge der Schichten wurde so gewählt, dass sie der Reihenfolge der enzymatischen Reaktion entspricht. Es wurde festgestellt, dass ACS und ACOD im Film biologisch aktiv blieben.

NEFA-Konzentration bei T2D

NEFA-Konzentrationen im Blut wurden im Zusammenhang mit Fettleibigkeit und Bluthochdruck untersucht. Es wurde gezeigt, dass diese Verbindungen die Erhöhung des Blutdrucks durch a1-adrenerge Stimulation fördern und den oxidativen Stress erhöhen. NEFAs werden auch mit dem metabolischen Syndrom in Verbindung gebracht. Diese Verbindungen können bei der Entstehung von Bluthochdruck wichtig sein.

Es wurden mehrere Modelle vorgeschlagen, um die Plasma-NEFA-Reaktion auf eine intravenöse Glukosebelastung zu beschreiben. Das Boston-Modell stellte die vierte Phase des NEFA-Konzentrationsanstiegs genau dar. Das Modell beschrieb jedoch nicht die anfängliche Latenzphase. Das Fabian-Modell verwendete eine einfache exponentielle Steigung, um diese Phase zu beschreiben. Ebenso war das Thomaseth-Modell nicht in der Lage, die Rebound-Phase zu beschreiben.

NEFA-Gehalte in Triglyceriden

Mehrere Studien haben die Auswirkungen einer bariatrischen Operation auf die NEFA-Zusammensetzung im Plasma untersucht. In einer 2016 veröffentlichten Metaanalyse waren die Serum-NEFA-Spiegel 6 und 12 Monate nach der Operation verringert. Dies könnte auf einen verringerten Insulinspiegel zurückzuführen sein. In einer anderen Studie wurden Plasma-NEFAs bei einer Gruppe adipöser Patienten vor und nach einer Roux-en-Y-Magenbypass-Operation gemessen.

Die Konzentrationen von sieben NEFAs waren 9 Monate nach der Operation verringert. Linoleat (eine Omega-6-Fettsäure) wurde um 18:2, Stearat um 18:0 und Oleat um 16:0 reduziert. Die Konzentration von Docosahexaenoat wurde jedoch nicht beeinflusst. NEFAs wurden in Fettsäuremethylester (FAMEs) umgewandelt. Diese wurden dann mittels Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS) analysiert.